氨基酸是蛋白质、营养制剂和发酵产品的基础成分。但大多数氨基酸只有很弱或没有紫外吸收(芳香族氨基酸除外),传统 HPLC-UV 分析往往需要柱前或柱后衍生化,流程繁琐、重复性受衍生效率影响。用电雾式检测器(CAD)可以免衍生化直接通用检测氨基酸,大幅简化方法。
一、氨基酸检测的痛点
18 种常见氨基酸中,只有酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸等少数含芳环、有紫外吸收,其余大多数(甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸等)在 UV 下几乎无信号。为了用 UV/荧光检测,通常要用 OPA、FMOC、茚三酮等试剂衍生,既增加操作,也引入衍生不完全、副产物等误差来源。
二、HPLC-CAD 实测色谱条件
下表为瓴峰 SparkFlux2000-CAD 分析 18 种氨基酸混合样品的一组参考条件(数据来源于产品应用文集):
| 样品 | 18 种氨基酸混合溶液 |
| 配置方法 | 用纯水配置为 500 ppm 混合母液,进样浓度约 50 ppm |
| 色谱柱 | Acclaim 120 C18 (250 mm × 4.6 mm,5 μm) |
| 流动相 | 乙腈 / 10 mM 七氟丁酸水溶液 |
| 流速 | 0.8 mL/min |
| CAD 检测 | 蒸发温度按方法设定 |
| UV 对照 | 多波长紫外通道(用于与 CAD 对比) |
三、18 种氨基酸混合样品
实测混合样品包含以下 18 种氨基酸,在一次进样中实现分离与通用检测:
甘氨酸 · 丝氨酸 · 天冬氨酸 · 丙氨酸 · 苏氨酸 · 谷氨酸 · 胱氨酸 · 赖氨酸 · 组氨酸 · 精氨酸 · 脯氨酸 · 缬氨酸 · 蛋氨酸 · 酪氨酸 · 异亮氨酸 · 亮氨酸 · 苯丙氨酸 · 色氨酸
四、结果与对标
在相同条件下,CAD 通道可检出包括无紫外吸收氨基酸在内的全部组分,而 UV 通道仅对少数含芳环氨基酸有响应。在与进口同类电雾式检测器的对比测试中,瓴峰 SparkFlux2000-CAD 对 18 种氨基酸的峰面积与信噪比表现相当,可满足氨基酸分析的常规需求。
- 免衍生化:省去衍生步骤,缩短前处理时间,减少误差来源。
- 通用响应:有/无紫外吸收的氨基酸都能检出,一次进样全覆盖。
- 应用面广:氨基酸原料药、营养补充剂、培养基、发酵液等。
选型与本地落地
氨基酸分析常见于食品营养标签、保健品、发酵与饲料行业,免衍生化一次进样通测多种氨基酸能省掉繁琐的柱前/柱后衍生。做这类分析的北京、天津、河北实验室,除方法本身外更在意仪器货期、本地装机与售后响应:维科特瑞为瓴峰 SparkFlux2000 京津冀授权总代理,可先用你的实际样品做免费测试,本地交付通常 2-3 周,并提供装机培训与本地售后;预算或档期紧张时可配 CAD 租赁或先租后买过渡。国产CAD的完整选型与采购思路见:北京/京津冀怎么买国产电雾式检测器(货期/总账/选型决策)。
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